Proteínas da membrana plasmática constituem uma importante classe de proteínas. Elas estão envolvidas na transmissão de sinais externos para o interior da célula e no transporte seletivo de nutrientes/ions, através da membrana plasmática. Porém, o estudo dessas proteinas é difícil, porque elas são poucoabundantes e apresentam baixa solubilidade em tampões aquosos. Neste trabalho, nós avaliamos quatro estratégias diferentes para extrair proteínas da membrana plasmática de raízes de banana: (i) a técnica de sistema aquoso de duas fases, constituída porpolímeros(ATPS) combinada com eletroforese em gel e (ii) ATPS sem gel usandoLC-MS/MS, (iii) uma fração microssomal e (iv) uma fração, contendo o proteoma total celular, ambas as frações avaliadas via LC-MS/MS. Nossos resultados mostram que a estratégia baseada em eletroforese em gel é útil para a visualização de proteínas, mas apresenta limitações em termos de reproducibilidade e eficiência. Dentre as estratégias sem o uso de gel, a fração microssomal permitiu a identificação do maior número de proteínas de membrana plasmática, seguida pela fração de proteoma total e pela técnica de sistema aquoso de duasfases. O alto rendimento de proteínas de membrana plasmática proporcionado pela fração microssomal pode ser explicado pelo enriquecimento de proteínas de membrana nessa fração e pela eficiência do espectrômetro de massa na identificação de proteínas.

Plasma membrane proteins constitute a very important class of proteins. They are involved in the transmission of external signals to the interior of the cell and selective transport of water, nutrients and ions across the plasma membrane. However, the study of plasma membrane proteins is challenging because of their poor solubility in aqueous media and low relative abundance. In this work, we evaluated four different strategies for the characterization of plasma membrane proteins from banana roots: (i) the aqueous-polymer two-phase system technique (ATPS) coupled to gelelectrophoresis (gel-based), and (ii) ATPS coupled to LC-MS/MS (gel free), (iii) a microsomal fraction and (iv) a full proteome, both coupled to LC-MS/MS. Our results show that the gel-based strategy is useful for protein visualization but has major limitations in terms of time reproducibility and efficiency. From the gel-free strategies, the microsomal-based strategy allowed the highest number of plasma membrane proteins to be identified, followed by the full proteome strategy and by the ATPS based strategy. The high yield of plasma membrane proteins provided by the microsomal fraction can be explained by the enrichment of membrane proteins in this fraction and the high throughput of the gel-free approach combined with the usage of a fast high-resolution mass spectrometer for the identification of proteins.

Byrsonima intermedia é um arbusto do Cerrado brasileiro com propriedades medicinais. A conservação de material biológico em temperatura ultrabaixa (-196ºC) é conhecida como criopreservação e representa uma técnica promissora para a preservação da diversidade vegetal. O descongelamento é uma etapa crucial durante a criopreservação. O objetivo deste trabalho foi criopreservar embriões de zigóticos B. intermedia e realizar o descongelamento utilizando uma solução rica em sacarose à temperatura ambiente. Os embriões foram submetidos à desinfestação e dessecação em uma câmara de fluxo laminar por 0-4 horas antes da imersão em nitrogênio líquido. O teor de umidade (%) dos embriões foi avaliado. Embriões criopreservados foram descongelados em uma solução rica em sacarose à temperatura ambiente antes da inoculação em meio de germinação e mantidos em sala de crescimento. Após 30 dias, a germinação dos embriões foi avaliada. Após uma hora de desidratação não foram observadas diferenças estatísticas entre os diferentes tempos testados. Embriões com teor de umidade entre 34,3 e 20,3% germinaram após a criopreservação. Embriões não desidratados não sobreviveram ao processo de criopreservação. Embriões zigóticos B. intermedia podem ser criopreservados com sucesso e descongeladas à temperatura ambiente quando desidratados por pelo menos uma hora em câmara de fluxo laminar.

Byrsonima intermedia is a shrub from the Brazilian Cerrado with medicinal properties. The storage of biological material at ultra-low temperatures (-196°C) is termed cryopreservation and represents a promising technique for preserving plant diversity. Thawing is a crucial step that follows cryopreservation. The aim of this work was to cryopreserve B. intermedia zygotic embryos and subsequently thaw them at room temperature in a solution rich in sucrose. The embryos were decontaminated and desiccated in a laminar airflow hood for 0-4 hours prior to plunging into liquid nitrogen. The embryo moisture content (% MC) during dehydration was assessed. Cryopreserved embryos were thawed in a solution rich in sucrose at room temperature, inoculated in a germination medium and maintained in a growth chamber. After 30 days, the embryo germination was evaluated. No significant differences were observed between the different embryo dehydration times, where they were dehydrated for at least one hour. Embryos with a MC between 34.3 and 20.3% were germinated after cryopreservation. In the absence of dehydration, all embryos died following cryopreservation. We conclude that B. intermedia zygotic embryos can be successfully cryopreserved and thawed at room temperature after at least one hour of dehydration in a laminar airflow bench.